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线粒体老师的生物教学博客

 
 
 

日志

 
 

甲基绿和吡罗红混合染色剂的作用机理  

2012-10-30 16:08:25|  分类: 默认分类 |  标签: |举报 |字号 订阅

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我们在观察DNARNA的分布实验中用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂染色,由于甲基绿和吡罗红与DNARNA的亲和力不一样,呈绿色的是DNA,呈红色的是RNA,我们很容易用显微镜观察到DNARNA主要分布在那里。里面强调的是用甲基绿和吡罗红混合染色剂,所以隐含的意思是不能单独使用一种染色剂,要是单独用甲基绿染色就会把RNA染成绿色。

吡罗红,即吡罗红G,又名派洛宁,吡罗红使RNA呈现红色,常用于检测细胞中RNA的分布,与甲基绿一起混用甲基绿派洛宁 (methyl green-pyronin)为碱性染料,它分别能与细胞内的DNARNA结合呈现不同颜色。当甲基绿与吡罗红作为混合染料时,甲基绿与染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色;吡罗红与核仁、细胞质中的RNA选择性结合显示红色。其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用,同时两种核酸分子都是多聚体,而其聚合程度有所不同。甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。而吡罗红则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色(但解聚的DNA也能和吡罗红结合呈现红色)。即RNA对吡罗红亲和力大,被染成红色,而DNA对甲基绿亲和力大,被染成绿色。

1、二苯胺与甲基绿能否混用

这是用于鉴定DNA的存在的两种试剂,二苯胺加热法中,呈现蓝色反应。用甲基绿溶液直接滴在有DNA丝状物的载玻片或玻棒上,用水充分冲洗掉浮色后再观察,呈蓝绿色反应。只用一种即可,不混合用。前者要加热,后者不加热。

2、两者都可以和DNA反应,应该怎样区分它们呢

甲基绿甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状,能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基绿是最有价值的细胞和染色剂,细胞学上常用来染染色质,跟酸性品红一起可作植物木质部的染色剂。

3、甲基绿与二苯胺对于鉴定DNA的区别

DNA粗提取与鉴定这个实验,DNA鉴定则换成用二苯胺,在这个DNA粗提取过程中,用改变氯化钠浓度办法将蛋白质与DNA分开,用冷酒精处理进一步将DNARNA、蛋白质分开。一系列的操作就是要获得纯度较高的DNA,最后获得的纯度较高的DNA不能排除有RNA,所以此时用甲基绿鉴定DNARNA都被染成绿色,所以不能说绿色一定是DNA。而改用二苯胺就不一样了,DNA和二苯胺反应的产物成蓝色,RNA则没有这种颜色反应,所以用二苯胺鉴定呈蓝色的一定是DNA,并且蓝色深浅与DNA含量高低有关。

 

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